原代细胞转染

一、高效转染试剂精选

在科研领域中，选择正确的转染试剂至关重要。以下是几款推荐的转染试剂：

1. RFect质粒转染试剂

专为小鼠原代小胶质细胞设计，能够轻松转染过表达质粒（OE-FANCC）和shRNA质粒（KD-FANCC）。通过免疫荧光验证，其转染效率令人瞩目。

2. ProteanFect系列试剂

这是西湖大学研发的非病毒、非电转试剂。针对原代免疫细胞如T细胞、NK细胞，其转染效率高达97%。更值得一提的是，它支持高通量筛选，如在96孔板中仅需45分钟即可完成转染。

二、前沿技术突破

在关键技术上，生物凝聚体递送技术引人注目。ProteanFect利用细胞内的天然机制，与核酸自组装形成纳米结构，从而实现高效递送。这一技术避免了传统方法的细胞毒性，更加符合细胞的自然特性。

三、操作指南优化

为了获得最佳转染效果，操作细节至关重要：

1. 预处理与转染步骤

转染前确保更换预热至37℃的培养基。在添加脂质体/DNA混合物时，需沿培养皿边缘逐滴加入并轻摇，确保混合物分布均匀。

2. siRNA转染细节

对于悬浮细胞，选择对数生长期的细胞进行转染。制备转染复合物时，需按照比例混合siRNA和转染试剂（如Entranster-R0），静置后加入含血清的培养基。

四、应用领域及实例

这些转染方法和试剂在多种场景中表现出色：

1. 免疫细胞研究

如在原代T细胞中利用ProteanFect实现CRISPR基因编辑，为CAR-T的制备提供有力支持。在小鼠原代巨噬细胞（BMDM）中研究药物靶点与胆固醇代谢机制。

2. 神经科学研究

在小鼠原代小胶质细胞中，通过转染研究蛋白功能对神经炎症的影响，揭示了细胞内部复杂的机制。

五、注意事项与常见问题解答

确保转染过程的顺利进行，需要注意以下几点：

1. 监控细胞状态

转染后6小时内密切监视细胞活性，并及时更换培养基以减少沉淀对细胞的干扰。排除可能的细菌或支原体污染，并优化MOI值（病毒载量）。

2. 参数调整

不同的原代细胞对转染条件的反应不同，因此需要根据具体的细胞类型摸索最佳质粒浓度、转染时间及血清比例。

通过以上结合传统优化策略与前沿技术的方法，可以显著提高原代细胞的转染效率，同时维持细胞的活性，为科研工作者带来更为便捷和高效的研究体验。